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技术专栏

ELISA实验中标曲怎么做?
供稿:市场部发布时间:2024-01-19浏览量:292次
 
 

曲线绘制的使用工具

 

以下所述中使用的曲线绘制软件为Curve E xpert1.4, 各位老师们如有需要即可点击此链接下载自行下载使用;

 

标准曲线的绘制
 

可以采用各种绘图软件来绘制 ELISA 标准曲线,下面以“Curve Expert1.4”软件为例,绘制 ELISA 标准曲线的方法如下;

1.启动“Curve Expert”

2.X 轴输入标准品的 OD 值(双抗夹心输入 OD-空白值),Y 轴输入所对应的浓度值,如图:

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

3.单击[运行]按钮,出现如下对话框

 

4.单击[ok]按钮,出现如下两个对话框,关闭下面一个对话框

 
 

5. 在对话框的右上角出现一些曲线的名称,从“1”开始依次点击曲线名称,在右下角会出现相应拟合的曲线。(一般选择第一个多项式拟合)

6. 根据拟合的曲线选取 ELISA 拟合度最佳的曲线双击,出现如下对话框:注意:选择系数(即“r”值)最好的曲线方程来进行运算。

在下面的对话框 右上角有“r”值,当“r”值越接近 1 拟合度越好

 

7.按[Ctrl]键+[L]键,出现如下对话框:

 

8.输入标准的 OD 值,单击[Calculate]按忸,即可得到待测蛋白的实际含量(标本稀释了 N 倍,运算出的数值应在乘以 N)。 

9. 如想得到 ELISA 拟合曲线的方程,可在步骤 6 的对话框空白处右击,选择”Information”

10. 得到如下对话框:点击“Copy”

在你需要的位置粘贴即可得到如下数据:

Rational Function: y=(a+bx)/(1+cx+dx^2) 

Coefficient Data: 

a = -21.531017 

b = 212.05019 

c = -0.24054479 d = 0.018060778 

11. 修改作图中 X,Y 坐标轴高度以及相关属性 选择步骤 9 所示图中的第二排“Graph Properties”,修改好后点击 OK 保存

 

做标准曲线时有几个问题需要注意

 
注意事项一

1、样品的浓度是根据标准曲线计算出来的,所以要严格按照说明书指示进行操作,标准曲线能直接反映操作是否准确。

 
注意事项二

2、样品浓度较高时,应当稀释样本再进行检测,样品OD值在标准曲线范围内才能得到更准确的计算结果。

 
注意事项三

3、标准曲线的样品数一般为7个点(除去零孔/背景孔),但至少要保证有5个点,当标曲有个别孔读数值不正常时,可以抠除。

注意事项四

4、夹心法的标曲制作和样本浓度计算时需要减掉0孔背景值,竞争法不需要。

 
注意事项五

5、做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动,但一般来说,相关系数R至少要大于0.99,R值越接近1,说明标曲拟合越好。

 

 
 
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