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技术专栏

内参抗体怎么选
供稿:技术部发布时间:2022-05-11浏览量:1112次

内参抗体可用于评价蛋白质免疫印迹法(Western Blot)的效率,比较凝胶中每孔的蛋白上样量。此类对照可帮助确定样品间表达水平的差异,以判断是由细胞裂解物的实际蛋白水平导致,还是由上样量的差异导致。

内参抗体主要功能

(1)检测整个WB流程是否正常

(2)检测基因表达产物是否正确

(3)比较产物微量的相对变化

(4)评价各个上样孔内蛋白的总量是否基本一致

图片

图一示例

内参抗体在目标蛋白的免疫荧光研究中,也可以作为共染的阳性对照。内参抗体分为未标记型和标记型,标记物包括生物素、HRP、FITC、PE、Cy染料和Alexa Fluor染料。

内参抗体种类很多,比如β-actin、β-tubunlin、GAPDH、Vinculin、LaminB、PCNA等,对不同样本选择不一样的内参抗体也是WB实验成功的关键。本文将简单介绍选择内参抗体应遵循的五项原则:

 

一、样本种属来源:

首先要考虑实验样本来源于什么物种。

 

1. 哺乳动物的组织或者细胞样本,通常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Histone H3、Na,Katpase等。

 

2. 植物来源实验样本,则可以选择plantactin、Rubisco等。

 

3. 其他来源样本研究较少,所以就应该参照期刊文献数据,选择合适的蛋白作为内参。

 

二、分子量大小:

选择内参抗体时,应该考虑目的蛋白分子量的大小,一般保证目的蛋白与内参蛋白分子量相差5KD以上。例如,目的蛋白分子量为40KD,此时不适宜选择β-actin、与GAPDH作为内参,可以考虑选择α-Tubulin或者β-tubulin作为内参。

 

三、表达水平:

选择的内参蛋白需要在待测样本中是高表达的。常用的内参蛋白是由管家基因高表达的,是细胞发育和维持细胞活力所必须的。例如,细胞核的内参蛋白 PCNA,在 DNA S 期表达,因此对于非增殖细胞不推荐使用。

 

四、目的蛋白表达定位:

图片

 

 

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五、ELK Biotechnology可选相关内参:

适用范围 名称 货号 分子量
胞质 β-Tubulin EM1114 50kDa
β-Actin EM1031 43kDa
α-Tubulin EM1115 52kDa
GAPDH EM1028 37kDa
Vinculin ES3700 123kDa
Cyclophilin B EM1219 21kDa
核膜蛋白 Lamin B EM1035 68kDa
核蛋白 PCNA EM1030 29kDa
TATA binding protein TBP/TBP EM1216 38kDa
YY1 ES11233 45kDa
HDAC1 ES4225 55kDa
Histone H3 EM1037 15kDa
膜蛋白 ATPase Na+/ K+ beta 2 (ATPB2) / 112kDa
质膜 ATP1A1 (Sodium Potassium ATPase) ES2892 100kDa
线粒体 COX4 EM1032 15kDa
VDAC1 ES4120 31kDa

全血

血浆

血清

Transferrin EM1231 77kDa
Albumin EM1190 66kDa
植物内参 Plant actin EM1147 43kDa
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