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技术专栏

通过两种软件计算ELISA结果
供稿:Technical division发布时间:2022-05-04浏览量:3471次

方法一:使用Curve  Expert1.4软件(点击下载Curve  Expert1.4

标准曲线的绘制 

可以采用各种绘图软件来绘制ELISA标准曲线,下面以“Curve  Expert1.4”软件为例,绘制ELISA标准曲线的方法如下;

1.启动“Curve  Expert”

2.X轴输入标准品的OD值(双抗夹心输入OD-空白值),Y轴输入所对应的浓度值,如图:

3.单击[运行] 图片 按钮,出现如下对话框

4.单击[ok]按钮,出现如下两个对话框,关闭下面一个对话框

5. 在对话框的右上角出现一些曲线的名称,从“1”开始依次点击曲线名称,在右下角会出现相应拟合的曲线。

(一般选择第一个多项式拟合)

 

 

 

6. 根据拟合的曲线选取ELISA拟合度最佳的曲线双击,出现如下对话框:

注意:选择系数(即“r”值)最好的曲线方程来进行运算。在下面的对话框

右上角有“r”值 ,当“r”值越接近1拟合度越好

7.按[Ctrl]键+[L]键,出现如下对话框:

8.输入标准的OD值,单击[Calculate]按忸,即可得到待测蛋白的实际含量(标本稀释了N倍,运算出的数值应在乘以N)。

 

9. 如想得到ELISA拟合曲线的方程,可在步骤6的对话框空白处右击,选择”Information”

10. 得到如下对话框:点击“Copy”

 

在你需要的位置粘贴即可得到如下数据:

Rational Function: y=(a+bx)/(1+cx+dx^2)

Coefficient Data:

a =   -21.531017

b =  212.05019

c =  -0.24054479

d =  0.018060778

 

11. 修改作图中X,Y坐标轴高度以及相关属性

选择步骤9所示图中的第二排“Graph Properties”,修改好后点击OK保存

 

方法二: 使用OriginPro 2021软件计算竞争法试剂盒ELISA结果

第一步:我们以PG(Progesterone) ELISA Kit 这个试剂盒为例

 

 

将标曲的数据复制粘贴在如下表框中

按下Ctrl+A键全选然后鼠标依次单击,Analysis---Fitting---Nonlinear Curve Fit---Open Dialog...

 

在Function Selection选项卡中,将 Category 参数设置为 Statistics

将Function参数设置为 Logistic

 

在Find X/Y选项卡中对 Find X from Y 进行勾选,然后单击 Fit 键

横纵坐标选择Log10参数,注意from / to 的上下限值的选择,完成后单击OK 键

 

最后结果计算,竞争法由于OD值与样品浓度成反比关系,所以不需要减去零孔背景值,如果是夹心法的试剂盒,则还需要事先在excel中减去背景值然后再依据教程进行计算。

 

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